AG百家乐 人B细胞淋巴瘤OCILy19培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人B细胞淋巴瘤OCILy19

生长特性：悬浮生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基+10% FBS+1% P/S

传代方法：首次建议1:2传代，传代情况每2天更换培养液。

备注：请使用无菌离心管收集瓶内培养基，以便于后续对比培养。如果对比效果不佳，建议直接采购AG百家乐的完全培养基。

二、细胞接收处理

收到账户细胞后，请将其培养至良好状态，随后注满完全培养液并密封瓶口，这是运输细胞的最佳方式。在处理细胞前，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶以进行消毒，随后在超净工作台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO₂的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，然后再进行后续处理。利用显微镜观察细胞生长情况，并进行不同倍数的拍照保存（最好拍摄40x、100x及200x的照片），前三天的照片是重要的售后依据。若未能提供照片，则默认收到的细胞状态良好。（在传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，并在换液后适度松开瓶盖。）

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，请将瓶内的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，并放入37℃、5% CO₂的孵箱中培养。如果细胞密度超过80%，请按照以下步骤进行传代：

1. 弃去培养上清液，用不含钙镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱消化1-2分钟。之后在显微镜下观察细胞消化状态，如细胞大部分变圆并脱落，迅速将其转回操作台，轻拍培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，并弃去上清液，随后加入1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 将细胞悬液按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放置在37℃、5% CO₂的细胞培养箱中培育。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，请弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后迅速加入5ml完全培养基以终止消化，再轻轻吹打细胞使其脱落。将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清液，沉淀细胞后添加1ml的AG百家乐无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接置于-80℃冰箱中，如果计划转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），快速置入37℃水浴中解冻，至冻存管中无结晶后，用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移到含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清液，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，并放于37℃、5% CO₂的细胞培养箱中继续培养。
4. 次日，更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞由于附壁不牢，运输过程中可能发生细胞脱落，这属于正常现象。如脱落较严重，可将培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养（后续对比培养）。此后可加入1-2ml胰酶进行轻轻消化，重悬后消化1-2分钟，再加入5ml完全培养基终止反应。随即离心，弃去上清液，最后加入1-2ml完全培养基重悬。最后请按1:2比例进行传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并放置于37℃、5% CO₂的细胞培养箱中继续培养。

五、售后条款

1）细胞问题的重新发货情况及标准

1. 由于运输过程中的各种问题，如细胞丢失、瓶身破损或严重漏液等，均可申请重发。
2. 细胞污染问题需在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后可申请重发。
3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存的细胞复苏后24小时后，若大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可申请重发。
4. 如干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时后且未开封，出现污染，均可申请重发。
5. 若细胞活性问题请在收到产品7天内，提供真实实验结果并采用台盼蓝染色法评估细胞活力，核实后可申请重发。
6. 收到单细胞当天以及第2、3天请拍照，3天内未告知的，视为产品合格。如果在4-7天内出现问题，并能提供前3天照片及细胞问题时的照片，以及详细操作步骤，并与技术人员沟通的，若被判定为我方责任，依规定重发。

2）细胞问题不予重发的情况

1. 因客户造成的细胞污染，无法重发。
2. 因客户不当操作导致细胞状态不良，无重发资格。
3. 使用非本库推荐培养体系的细胞状态不佳，不再重发。
4. 细胞状态不良且未提供前3天照片者，无法重发。
5. 在细胞培养过程中进行其他处理的，无法重发。
6. 收到细胞后2天内未报告的，不予重发。
7. 其他情况按具体情况而定。

通过以上步骤，您可以更好地培养和管理OCILy19细胞，确保在使用AG百家乐的产品时获得最佳效果。