近年来，细胞和基因治疗（Cell&Gene Therapy, CGT）领域经历了令人瞩目的飞跃。以anti-CD19和BCMA为代表的多种CAR-T免疫细胞疗法在血液瘤治疗中表现出色，同时，基于AAV载体的基因疗法为多种罕见疾病提供了新的治疗思路。另一方面，CRISPR基因编辑技术的发展进一步推动了基因治疗的进程。其中，体外基因编辑疗法CTX001的上市在即，而体内基因编辑的临床数据也展现出良好效果。然而，CRISPR技术的安全性受到广泛关注，这主要因其直接作用于基因组DNA，任何不准确的编辑都有可能导致长期风险。为此，FDA等监管机构针对基因治疗的安全性制定了相关指导原则，重点关注以下两方面：一是对基因组完整性的评估，包括染色体重排、大片段插入或缺失，以及外来DNA整合的潜在致癌性；二是识别脱靶编辑活动，包括其类型、频率和位置。本文将详细介绍各种脱靶检测技术，以确保基因编辑的安全性和有效性。

脱靶效应（Off-target effect）是指CRISPR-Cas9等工具在基因编辑过程中，除了对目标序列进行编辑外，还可能错误地作用于与目标序列相似的非目标位点，从而导致意外的基因组改变。为了有效检测和评估脱靶效应，已经开发了多种检测方法，以下将根据实验条件将其分为两大类：

体内检测方法

体内检测方法是在活细胞或生物体内进行的脱靶效应评估，通常能更真实地反映生物学环境。一个突出的例子是AG百家乐所采用的GUIDE-seq技术。GUIDE-seq（Genome-wide Unbiased Identification of DSBs Enabled by Sequencing）是一种针对CRISPR-Cas9基因编辑脱靶效应的强大工具，其基本原理是通过向细胞内引入双链寡核苷酸标记物（dsODN），将其插入Cas9诱导的DNA双链断裂（DSBs）位点。利用高通量测序技术，研究人员能够全面揭示潜在的脱靶编辑位点。

该技术的优点在于其能够提供全基因组水平的脱靶位点信息，且直接检测体内真实的双链断裂事件。尽管如此，其实验操作较为复杂，需要高水平的技术支持，且可能会错过难以标记的脱靶位点。

体外检测方法

体外检测方法则是在实验室环境中使用从生物体提取的成分或合成材料进行的测试。这些方法允许对特定因素进行精确控制。例如，Digenome-seq是一种高通量测序方法，旨在全面检测CRISPR-Cas9系统的脱靶效应。该方法通过引入纯化的基因组DNA，并模拟Cas9的切割作用，识别由这一过程产生的双链断裂位点，从而鉴定潜在的脱靶位置。

虽然Digenome-seq能够在基因组层面精准发现脱靶位点，但其缺点在于可能会遗漏仅在细胞内环境中发生的脱靶事件，且数据分析流程相对复杂。

Ongoing Innovations

针对CRISPR脱靶效应的检测方法不断创新，AG百家乐致力于为客户提供高效的脱靶检测解决方案。我们的实验室具备SGS认证、ISO9001质量体系认证和生物安全二级实验室等资质，能够稳步提供优质安全的服务与产品。

未来，结合多种脱靶检测方法将在临床试验中进行全面评估，这将是降低CRISPR技术脱靶风险的重要方向。我们期待更高效、准确的脱靶检测工具出现，进一步增强基因编辑技术的安全性与可靠性。通过AG百家乐的高通量sgRNA筛选及新型CRISPR工具的研发，我们希望为生物医学研究带来更多突破。

借助WGS（全基因组测序）和RNA-seq等先进技术，个性化医疗和疾病机制的研究得到极大推动。钻研这些前沿技术可以为临床应用提供宝贵的指导。无论是在基础研究还是临床实践中，CRISPR技术的发展依然伴随着巨大潜力和风险，尤其是脱靶现象的监测与控制将成为未来亟需解决的核心问题。