AG百家乐提供的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383培养说明书详细阐述了该细胞的培养条件及操作步骤，帮助研究人员在实验中获得最佳的细胞生长。以下是关于细胞培养的具体信息：

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383

生长特性：贴壁和悬浮混合生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：F12K + 20% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议1:2比例传代，传代后每2天更换培养液。

备注：悬浮细胞需通过离心收集，而贴壁细胞则需采用贴壁方法处理，收集后的培养基可用于过渡培养。

二、细胞处理与培养步骤

细胞收到后的处理

在细胞状态良好的情况下，应灌满完全培养液并封好瓶口。这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后放置于超净台内进行严格的无菌操作。接着，将细胞瓶置于37℃，5% CO2培养箱中静置3-4小时以恢复细胞状态。使用显微镜观察细胞生长情况，并在不同倍数下拍照（建议每个倍数拍一张，具体为40x, 100x, 200x），头三天的照片是重要的售后依据，如无照片则默认收到状态良好。

细胞传代操作步骤

a. 对于贴壁细胞：当未超过80%汇合度时，收集瓶内的培养液至离心管中，保留5ml完全培养基，放入37℃，5% CO2培养箱中培养；超出80%时则进行传代处理，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用无钙、镁PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若大部分细胞变圆且脱落，立即停止消化，加入5ml以上的完全培养基。
3. 轻轻吹打使细胞彻底脱落，吸出悬液，并转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清，添加1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新完全培养基至每瓶5-8ml后，置于37℃，5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 对于悬浮细胞：传代可采取以下方法：

1. 方法一：收集细胞，以1000 RPM离心8-10分钟，弃去上清，加入1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2比例转移至含8ml完全培养基的新瓶中。
2. 方法二：选择半数换液方式，弃去一半培养基后将剩余细胞悬起，按1:2比例转移至新瓶中。

细胞冻存及复苏步骤

a. 粉尘冻存：细胞生长至覆盖培养瓶80%面积后，弃去培养液并用PBS清洗。添加0.25%胰蛋白酶，观察细胞若变圆后加5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞脱离，转移至离心管，1000 RPM离心5分钟，弃上清，加入1ml冻存液，混匀后存入冻存管。

b. 复苏细胞：从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻，擦拭冻存管外壁后，将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃上清后重悬细胞于培养基中，接种至T25培养瓶并置于37℃，5% CO2的培养箱中，第二天更换新鲜培养基继续培养。

三、注意事项

在运输过程中，有些细胞可能会脱落，这是正常现象。如脱落较多，应将所有培养液收集并进行离心处理。然后根据上述步骤进行细胞重悬和传代。

四、售后条款

1) 出现问题可重发的情况包括：运输期间损失、瓶身破损或严重漏液；收到后48小时内报告的细胞污染等。提供真实清晰的细胞状态照片将有助于重发的判断。

2) 不予重发的情况包括：客户造成的污染或错误操作导致细胞状态不佳，非推荐培养体系导致的问题，以及未提供前三天照片的情况等。

了解与掌握AG百家乐所提供的细胞培养细则，将帮助您更好地在生物医疗领域进行实验与研究。